Aloni, geboren in Tel Aviv, begon haar politieke carrière in de Arbeidspartij, die sinds de stichting van de staat Israël in 1948 het land tientallen jaren heeft geregeerd. Zij werd in 1965 voor het eerst parlementslid. Aloni verliet de partij in 1974 wegens een meningsverschil met de partijleiding over de invloed van religieuze leiders op de regering.

Van 1992 tot en met 1996 vervulde Aloni namens de linkse partij Meretz diverse ministersposten in de regeringen van de in 1995 vermoorde premier Yitzhak Rabin en diens opvolger Shimon Peres. Zij was onder meer minister van Onderwijs en Cultuur en van Wetenschap en Kunst.

Nadat zij in 1996 de politiek had verlaten, bleef zij zich inzetten voor de rechten van Palestijnen. Zo was zij bestuurslid van Yesh Din, een in 2005 opgerichte organisatie die hulp biedt aan de Palestijnen in het bezette gebied. In 2011 eiste zij tijdens een vredesdemonstratie het vertrek van Israël uit de westelijke Jordaanoever.